南京固与生物有限公司

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新一代核酸染料—CelRed 和CelGreen,EB完美替代品!

发布时间:2018-07-26 16:38 |  点击次数:

Goyoo(南京固与生物)公司研发推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬灭,可以用于胶回收。但价格较贵。

CelRed和 CelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。其特点有:

1)高灵敏度:CelRed和 CelGreen是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一;

2)稳定性极好:可以使用微波炉加热,可以在室温下保存;

3)更安全:艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB);

4)广泛的适应性:适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色;

5)染色过程简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗;

6)对 DNA 和 RNA 的迁移影响小:对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I;

7)与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容:使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时,CelRed可以完美的替代EB;使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时,CelGreen足以替代任意一种 SYB染料。但该染料会使小片段DNA迁移慢一些(与EB相比).

Gold View I型/II型

Goldview对于大片段DNA的染色效果良好,但是在对于500bp以下的片段效 果不是很好,还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭,一般5-10min条带就会消失。另外Goldview不适用于胶回收。 Goldview其实就是AO(丫啶橙,一种剧毒产品)且荧光效果远不如EB,灵敏度差,本底色严重,不利用于回收,不稳定,在紫外灯下其诱导突变能力极 高

SYBR Green 和SYBR Gold

稳定性差,也有毒性。它属于花箐素类核酸染料,花箐类染料不是无毒的,而只是低毒的, 电泳级别的是经过修饰的,修饰有三种:1.加入卤素或*基。2.插入环羟基。3.加入稳定剂。SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBRGreen I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA,从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力,使DNA或其他物质发生突变。

 


几种核酸染料的比较

 


 

新一代核酸染料—CelRed 和CelGreen

要想获得安全的凝胶染料必须能清除或最小化染料和基因组DNA的相互作用。基于这种原则,科学家们结合物质的结构特点,开发出了一款不会渗透乳胶手套*类手套和生物细胞膜的一种染料。

CelRedCelGreen是为代替高毒性的EB设计产生的新一代荧光核酸染料。由Biotium公司开发。相对于EB和其他的EB替代物,CelRedCelGreen有更多的优势:低毒性,高灵敏性,高稳定性。

EB由于其价格低和足够高的灵敏性,使其成为近几十年来最常用的核酸凝胶染料。但是 EB是一种强诱变化学试剂。由于其存在的安全危害以及处理污染物所花费的大量金钱,使其使用变得并不廉价,也不再方便。基于这种原因,替代品开始出现,比如SYBR系列染料近年来开始应用于市场中。但这些产品虽然降低了危害性,却损失了产品的灵敏性和稳定性。比如SYBR Safe的灵敏性很低,SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA,从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力,使DNA或其他物质发生突变(Ohta,et al.Mut Res 492,91(2001))。

SYBR Safe则不能做到。此外,环境安全实验也显示CelRedCelGreen对水栖动物没有影响,因此CelRedCelGreen没有环境破坏性,使用后能做一般的处置。

CelRedCelGreen特点:

更安全:艾姆斯氏实验以及其他实验证实无诱变性无细胞毒性;

更方便处理:通过了环境安全实验,可以直接丢弃无需特殊处理。

超灵敏:比EB和SYBR Safe更灵敏。

更稳定:室温下,溶液中可稳定存在。

使用更方便:可预染也可后染。

与常用的仪器兼容:CelRed可用EB常用仪器观察;CelGreen可用SYBR染料仪器进行观察。

可用于下游实验:普通的胶回收后,可用于下游实验。

 


 

 EB                                                CelRed

 

 SYBR Safe                                   CelGreen

 

 

图1. CelRedCelGreen比EB和SYBR Safe更灵敏。左图:比较了CelRed和EB 的1%预制胶,TBE缓冲液跑胶。右图:比较了CelGreen和SYBR Safe 1%琼脂糖凝胶的后染状况,同样在TBE缓冲液中完成。选用了Invitrogen的1 Kb的DNA Ladder作2倍稀释,分别加入四个泳道中,从左向右依次为200ng,100ng,50ng和25ng。

 

  SYBRSafe               CelRed               CelGreen

图2. CelRedCelGreen更安全,因为它们不能穿过活细胞的细胞膜结合到DNA上。用1×SYBR Safe,CelRedCelGreen分别在37℃孵育Hela细胞。随后用FITC处理过的SYBR Safe和CelGreenCelRed及Cy3处理CelRed孵育细胞。SYBR Safe很快进入细胞使核染色。CelRedCelGreen不能穿过细胞膜,不能观察到被染上色的细胞,仅在少量死亡的细胞中看到零星的荧光。